学术期刊第1期不同技术在淋系肿瘤MR

信仰是一棵树，它深深地扎根于旌准这片土地，枝丫触及每一个旌准人的心里。无论白昼与黑夜，天籁与尘音，它静默地伫立在灵魂深处，既不卑微，也不倨傲。也许阳光带来绿荫，严寒造成凋蔽，但在困顿中孕育出的终究出的是那蓬勃的生机。

每一位旌准人怀揣信仰，笃步前行，足履实地，专注于血液肿瘤与移植领域前沿研究成果的转化，为血液肿瘤临床诊断与移植配型提供精准信息。前路漫漫，血液肿瘤与移植领域有着太多的问题亟需解决：如何提升肿瘤微残留检测灵敏度及检测后何时进行干预；淋系肿瘤的重排与正常淋巴细胞重排差异根源是什么；CLL恶变的分子机制是什么；AML突变频率较低，抗原靶标较少，免疫疗法的出路在哪里；造血干细胞移植前后免疫细胞，尤其是T/B细胞克隆的谱系变化是怎样的等等。这些问题需要研究人员、临床医生、产品开发人员从不同角度去研究阐明。我们希望在专注于产品开发的同时，以研究主题的形式定期归纳总结血液肿瘤与移植领域前沿进展，与大家共同分享、探讨。独木难成林，一人难为众；我们深知自己力量的薄弱与渺小，愿竭尽所能，与大家勠力同心，共克血液肿瘤与移植领域难题，以磨而不磷之信仰，为血液肿瘤与移植的版图再添一片绿荫。

本期MRD主题总结

血液肿瘤治疗中，根据微小残留病灶（MRD）情况采取针对性的干预具有非常重要的作用。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和流式细胞术（FC）是目前监测MRD最常用的方法。

近年来，也有一些新的方法尝试用于MRD监测，比如等位基因特异性寡核苷酸定量PCR（ASO-PCR）、数字PCR（dPCR）、多参数流式细胞术（MFC）、二代测序（NGS）。然而，ASO-PCR由于操作过于繁琐，引物探针需要针对不同患者进行特异性设计，因此在临床应用中具有较大难度。dPCR在提升qPCR灵敏度中具有重要作用，由于缺乏统一的标准限制了在临床检测中独立应用。MFC针对不同血液肿瘤细胞表面多种免疫标志物进行标记，使得检测结果更为可靠。然而，由于抗体差异性、操作流程不统一等问题，MFC存在重复性差等问题。针对上述问题，欧洲流式工作组（EuroFlowgroup）已经完成MFC在ALL和MM的MRD检测标准流程和方法建立，CLL相关工作正在开展。B淋巴细胞分化过程中发生免疫球蛋白重链（IGH）重排，每一个淋巴细胞具有独一无二的IGH。因此，采用NGS技术检测IGH的重排判断MRD是非常好的选择。由于NGS能测出具体序列，因此在形态学、PCR等方法鉴别淋系肿瘤存在问题时，NGS是非常好的手段。EuroClonality-NGS工作组已开发了一套IG/TCR的检测流程，包括实验设计和生物信息分析方法，用于ALL患者MRD检测应用。那么，在PCR、(M)FC、NGS等多种手段存在的情况下，它们在MRD检测中的差异性如何？我们整理了PCR、(M)FC、NGS在淋系肿瘤MRD检测中比较性研究，总体而言，NGS灵敏度更高，对化疗、移植等预后评估更好。

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MRDDetectionbyNGSinIgH-V(D)JMayPredictRelapseRiskBetterThanMultiparameterFlowCytometryinB-CellAcuteLymphoblasticLeukemia

Li-XinWu1,Ya-LanZhou1,Zi-LongWang1,Jin-LanLi1,Qiu-YuSun1,HaoJiang1,QianJiang1,BinJiang1,FengYe2,Ming-KunLiu2,Zhi-Fuwang2,LinZhang2,Lan-PingXu1,Xiao-HuiZhang1,Kai-YanLiu1,Xiao-JunHuang#1,3,4andGuo-RuiRuan#11PekingUniversityPeople’sHospital,PekingUniversityInstituteofHematology,NationalClinicalResearchCenterforHematologicDisease,BeijingKeyLaboratoryofHematopoieticStemCellTransplantation,Beijing,China2BeijingGenomePrecisionTechnologyCo.,Ltd,Beijing,China3Peking-TsinghuaCenterforLifeSciences,Beijing,China4ResearchUnitofKeyTechniqueforDiagnosisandTreatmentsofHematologicMalignancies,ChineseAcademyofMedicalSciencesB-ALL通过MFC检出MRD阳性[MFC-MRD（+）]是复发的危险因素。然而，许多MFC-MRD阴性患者仍然复发。因此，探索具有更高复发预测能力的、更灵敏的MRD检测技术具有重要意义。本研究采集了53名成人B-ALL患者在诊断时全部和经过2次巩固化疗后部分样本。巩固化疗2周期后MFC-MRD诊断阴性（34名）与阳性（19名）的3年无复发生存期（RFS）为10.5％vs33.6％（P=0.）。53名受试者中19名受试者[MFC-MRD(+)8名，其中7名复发；(-)11名，其中9名复发]在通过Sanger测序检测时诊断出IgH-V（D）J重排。通过NGS对这19名患者进行复检，MFC-MRD（+）组的7名复发受试者和MFC-MRD(-)组中的6名复发阳性受试者在NGS-MRD中被检测为阳性。MFC-MRD（+）组中仅有的1例未复发受试者和MFC-MRD(-)组中的2例未复发受试者均在NGS-MRD(-)组被检出。因此，NGS-MRD可以将假阴性率从MFC-MRD(-)组中的81.8％（N=9）显著降低到NGS-MRD(-)组中的50.0％（N=3）。RFS分析表明，与MFC-MRD相比，NGS-MRD更好地区分了两组复发风险情况。本研究表明，巩固化疗2周期后MFC-MRD检测会产生大量假阴性结果，深度下一代测序技术可以改善复发的预测能力，从而降低假阴性率，帮助医生精确地决定进一步干预措施。

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IdentifyingIGHdiseaseclonesforMRDmonitoringinchildhoodB-cellacutelymphoblasticleukemiausingRNA-Seq.

Leukemia.;doi:10./s---4.ZhenhuaLi,NanJiang,EvelynHuiziLim,WinnieHuiNiChin,YiLu,KeanHuiChiew,ShirleyKowYinKham,WentaoYang,ThuanChongQuah,HaiPengLin,AhMoyTan,HanyAriffin,JunJYang,AllenEng-JuhYeoh鉴定患者特异性的IGH/TCR序列是检测MRD的关键环节。传统一代测序方法耗时费力。B-ALL患者的IGH在转录水平具有较高的表达。ZhenhuaLi等使用RNA-seq方法从个儿童B-ALL患者样本中鉴定IGH克隆序列，用于检测MRD。基于齐夫定律可以从RNA-seq数据中鉴定出与疾病相关的IGH优势克隆序列。从90.3%的患者样本中鉴定出条克隆序列（平均2条/每个样本，0-7条/每个样本）。其中，超二倍体的样本有更多的克隆序列（平均3条/每个样本），DUX4亚型因为染色体异位干扰了IGH基因位点，导致克隆序列偏少（1条/每个样本）。通过一代测序鉴定，有90.8%的克隆序列可以在RNA-seq数据中找到。此外，RNA-seq还鉴定出条二代独有的克隆序列。在69个监测样本中，相比于非IGH靶向的RQ-PCR方法，高通量IGH靶向测序方法检测的MRD具有高相关性（R=0.93;P=1.3×10-14）和更准确的复发预测能力。因此，RNA-seq方法可以鉴定出患者特异性的IGH克隆序列用于MRD监测，从而增加了RNA-seq方法在儿童B-ALL分子诊断中的应用。

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Standardizednext-generationsequencingofimmunoglobulinandT-cellreceptorgenere

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